猪群监测新方法——唾液检测法
农业部种猪质量监督检验测试中心 樊福好

前言：
　　血清学检测在猪群免疫监测和疾病诊断中发挥着重大作用，但由于血液采集对技术要求较高，必须具备专用的血清分离设备（如离心机等），且操作程序复杂，况且一旦发生溶血或污染，对检测结果影响较大，人们一直期望有新的检测方法诞生。
　　唾液学方法是其中较有发展前景的方法之一。
　　唾液学方法的优点：唾液学方法中采集的唾液可以直接冷冻，唾液中的各种酶类（如唾液淀粉酶，碱性蛋白酶）和抗菌物质可以使样品保存更长时间。
　　采集唾液的方法简单，所以唾液学方法对机体无任何损伤，不会造成猪只应激，值得推广。
　　另外，唾液中的抗体以分泌型抗体为主，对于免疫功能的解释具有特殊的意义。
唾液采集方法：
唾液采集的方法非常简单，利用猪只的好奇心理以及嗜好咀嚼的特性，采用纱布球采集唾液。将纱布制作成纱布球固定于金属线前端，猪只会主动咀嚼纱布球，唾液将通过虹吸现象进入纱布球内。将纱布球内的唾液挤压出，释放至样品袋袋内。将样品袋内的唾液转移至离心管内。

图1 制作纱布球

图2 采集唾液

 图3 挤压纱布球、收集唾液

  图4 样品袋内收集的唾液

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　图5 离心管内收集的唾液
检测方法：
　　采集的血液必须进行预处理，方可进行抗体或病原等项目的检测。
　　10x104转/分钟，离心1分钟，去除杂质，留取上清。
　　按照常规程序进行ELISA或PCR检测。
结果判定：
　　1、唾液中的病原检测若呈阳性，说明机体正在排毒。
　　2、由于唾液中的抗体和血液中的抗体不是同一个概念，必须避免使用对血清抗体的理解来解释唾液中抗体的作用。血清中的抗体大部分为循环抗体，某些循环抗体的抗病活性较低，只能与抗原起机械结合作用，而分泌型抗体的产生速度是血清循环抗体产生速度的两倍，分泌型抗体除具有机械结合作用外，尚具有对抗原的主动捕捉作用，补体的经典和补充途径激活作用，ADCC作用以及凝集作用。
　　为了便于理解唾液中的抗体作用，可以采用相对抗体（相对量抗体）的概念。
相对抗体：
　　指按照同一方法检测出抗体量的相对大小，往往指同一实验室，同一类试剂盒，同一类样品所得出结果的相对大小（百分比表示）。相对抗体的修正参数必须建立在大量检测数据的基础之上，这些数据必须包括完全阴性值，低抗体滴度值，中抗体滴度值和高抗体滴度值，样本以大样本量为宜，标准差至少在30以上。
　　相对抗体的概念解决了不同实验室之间，不同试剂盒之间和不同类型样品之间（如血液与唾液）的测定值的可比性问题，相对抗体值的大小亦不受试剂盒阴阳性对照值大小的影响。而绝对量抗体则不具备此类特性。
10份唾液中均检出猪瘟病毒抗体，OD值（阻断ELISA）和相对抗体如下表所示。（表1）

重要说明：
　　唾液中出现分泌型抗体，说明机体近期被病原感染或近期接受弱毒疫苗的免疫接种；分泌型抗体的出现，也同时说明机体具备对某病原的实质性抵抗能力。