7 种常用猪流行性腹泻疫苗临床免疫效果观察和评估

陈 静，刘德清，张 宁，蒋振南，郭 旋，龙 凤，刘 磊，黄伟坚

（广西大学动物科学技术学院；广西农垦永新畜牧集团金光有限公司）

摘 要：鉴于猪流行性腹泻危害严重，且国内常用的疫苗免疫效果不一，本试验随机选取广西金光国有化猪场 6 周龄猪 40 头，分别免疫常用的 7 种国产腹泻疫苗，并在首免后 21 d 进行攻毒试验。通过观察猪只的发病情况、监测猪只的抗体水平及排毒情况，对疫苗的免疫效果进行评估，为猪场筛选合适的疫苗、制定合理的免疫程序提供参考。

本试验通过评价国内不同厂家生产的 7种腹泻疫苗对猪的免疫保护效果，为免疫防控该病提供参考。

1 材料与方法

1.1试验材料

1.1.1试验猪 本试验于 2012 年 7—12 月在广西农垦永新畜牧集团金光有限公司 XY 猪场进行。随机选取 6 周龄健康仔猪 40 头，随机分为 8 组，每组5 头，相互分栏隔离饲养管理。母猪于产前 27 d 免疫 TB （成都天邦）腹泻二联灭活苗。

1.1.2 试验用疫苗 本试验所用的 7 种疫苗均从市面购买，分别为 HY 腹泻二联灭活苗、HL 腹泻二联灭活苗、TB 腹泻特制二联灭活苗、ZY 腹泻二联灭活苗、SDLD 腹泻三联冻干弱毒苗、HS 腹泻二联冻干灭活苗、TB 腹泻二联灭活苗。二联苗均为猪传染性胃肠炎-猪流行性腹泻二联苗，三联苗为猪传染性胃肠炎-猪流行性腹泻-猪轮状病毒三联苗。

1.1.3 病毒来源 本试验攻毒所用的病毒液来自金光公司保存的阳性病料—7 日龄仔猪肠道及内容物，多重 RT-PCR 检测为 PEDV 阳性，加入青霉素、链霉素研磨，使其终浓度为 1 000 U/mL，加入到30%甘油生理盐水中，-20 ℃保存备用。

1.1.4 检测试剂 （略）

1.2 试验方法：

1.2.1 试验前准备 试验开始前给猪标耳号、称重，观察猪只采食量、粪便及精神状况等，做好相关记录。采用 RT-PCR 方法对猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒基因进行检测，确定为阴性。

1.2.2 疫苗接种 对 7 组共 35 头试验猪按使用方法后海穴注射疫苗 1 mL/头，对照组 5 头不做疫苗免疫。首免与二免间隔 7 d，观察记录猪只体重、采食量、排便情况等以及疫苗是否存在不同程度的副作用、灭活苗是否灭活彻底、对照是否仍然成立等影响因素。

1.2.3 攻毒 首免后 21 d 对 8 组试验猪进行攻毒，剂量为 5 mL/头，方法为口服。攻毒后观察记录猪只采食量、精神状态、排便、发病、死亡等情况。

1.2.4抗体检测（略）

    1.2.5病原检测（略）

2 结果

2.1 试验猪临床发病情况：

从试验开始至结束，免疫组与对照组猪群食欲、精神状况、体重均无明显变化。首免 3 d 后，个别猪开始表现轻微拉稀症状，二免后 3 d 症状已趋于好转，具体情况见表 1。

攻毒后 4 h，试验猪开始出现症状，主要表现为拉稀，小猪屁股周围被粪便污染，猪舍地面散布稀粪，但未见食欲不振、呕吐、消瘦、脱水等状况；攻毒后 2 d 达到高峰，随后趋于好转，7 d 已完全正常，至出栏无 1 头试验猪出现流行性腹泻临床症状和死亡，具体情况见表 2。

                 表1 接种疫苗后试验猪腹泻情况                     头

                  表2 攻毒后试验猪腹泻情况                        头

2.2 试验猪流行性腹泻抗体水平（略）

2.3 试验猪流行性腹泻病毒排毒情况（略）

3 分析与讨论

3.1 猪流行性腹泻疫苗的免疫效果

目前，国内外关于猪流行性腹泻疫苗的研究相对较少，已研制的疫苗包括组织灭活苗、细胞灭活苗、细胞弱毒苗和转基因植物疫苗、联苗等。我国猪场应用比较广泛的主要是灭活苗和弱毒苗。本试验首次将国内常用的猪流行性腹泻 6 种灭活苗和 1 种弱毒苗做统一比较，从临床症状来看，SDLD 腹泻三联冻干弱毒苗接种后较 6 种灭活苗临床症状轻微，攻毒后腹泻猪也较少，但其作为弱毒苗存在毒力返强的危险，限制了其在生产中的应用；6 种灭活苗中，从免疫后的不良反应和攻毒后的临床发病情况来看，TB 腹泻二联灭活苗较其他疫苗有更好的免疫效果，这为广西规模化猪场猪流行性腹泻疫苗的选择提供了参考。

3.2 合理的免疫程序

目前，我国规模化猪场采取的免疫程序一般为只在阳性猪场免疫或母猪产前 27 d 后海穴免疫 1 次，可在一定程度上预防流行性腹泻的发生，但由于其为后海穴免疫，保定不到位、剂量和位置不准确等都易导致免疫失败从而无法预防发病。韩国政府建议对母猪实行 3 次接种（活苗-死苗-死苗）或 4 次接种（活苗-活苗-死苗-死苗），以使哺乳仔猪从初乳中获

得高水平的 PEDV 母源抗体，防止发病[5]。本试验所采用的仔猪二次免疫，攻毒后至出栏无一头猪死亡，证明此免疫程序在临床上具有一定的参考价值。

3.3 检测方法分析：（略）